Cinco forças:
● Instrumento configurado com extração de ácido nucleico e etapa purificada
● Instrumento configurado com módulo de extração ultrassônica
● Instrumento configurado com operação totalmente automática
● Instrumento configurado com amplificação de temperatura variável
● Instrumento configurado com kit de reagentes totalmente fechado
1.Os reagentes de detecção de ácido nucleico precisam ser extraídos e purificados?
O princípio da detecção de ácido nucleico é o seguinte: sob a ação do primer, a DNA polimerase é usada para realizar a amplificação da reação em cadeia no DNA/RNA modelo (exigindo transcrição reversa de NA) e, em seguida, a quantidade de sinal fluorescente liberado é detectada para determinar se a amostra contém o ácido nucleico (DNA/RNA) do patógeno a ser detectado.
1) As amostras que não foram extraídas ou purificadas podem conter muitos componentes que afetam o resultado final: nuclease (que pode dissolver o ácido nucleico alvo e causar falso negativo), protease (que pode reduzir a DNA polimerase e causar falso negativo), metal pesado sal (que leva à inativação da sintase e causa falso positivo), PH muito ácido ou muito alcalino (que pode causar falha na reação), RNA incompleto (levando a falha na transcrição reversa falso negativo).
2)Algumas amostras são difíceis de amplificar diretamente: Gram-positivas e alguns parasitas, devido às suas paredes celulares espessas e outras estruturas, se não passarem pelo processo de extração e purificação do ácido nucleico, o kit sem extração pode falhar para tal amostras.
Portanto, recomenda-se selecionar o kit de teste ou instrumento configurado com a etapa de extração de ácido nucleico.
2. Extração química ou extração física por fragmentação ultrassônica?
De modo geral, a extração química pode ser aplicada à maior parte do pré-tratamento e purificação.No entanto, em bactérias Gram-positivas de paredes espessas e em alguns parasitas, também acontece que a extração química não consegue obter modelos de ácidos nucleicos eficazes, resultando na detecção de falsos negativos.Além disso, a extração química geralmente utiliza agentes fortes; se a eluição não for completa, é fácil introduzir álcalis fortes no sistema de reação, resultando em resultados imprecisos.
A fragmentação ultrassônica utiliza trituração física, que tem sido utilizada com sucesso pela GeneXpert, uma empresa líder na área de POCT para uso humano, e tem uma vantagem absoluta na extração de ácido nucleico de algumas amostras complexas (como Mycobacterium tuberculosis).
Portanto, recomenda-se selecionar um kit de teste ou instrumento configurado com uma etapa de extração de ácido nucleico.e é ideal se houver um módulo de extração ultrassônica.
3. Manual, semiautomático e totalmente automático?
Este é um problema de custo de mão-de-obra e de eficiência do trabalho.Atualmente, os hospitais para animais de estimação não têm pessoal suficiente e a extração e detecção de ácidos nucleicos é um trabalho que requer certas habilidades e experiência.Não há dúvida de que a máquina totalmente automática de extração e detecção de ácido nucleico é a escolha perfeita.
4. Amplificação de temperatura constante ou amplificação de temperatura variável?
A reação de amplificação é um elo de detecção de ácido nucleico, e a tecnologia profissional envolvida nesse elo é complexa.Grosso modo, enzimas são usadas para amplificar o ácido nucléico.No processo de amplificação, o sinal de fluorescência amplificado ou o sinal de fluorescência incorporado é detectado.De modo geral, quanto mais cedo o sinal de fluorescência aparecer, maior será o conteúdo do gene alvo da amostra.
A amplificação de temperatura constante é uma amplificação de ácido nucleico a uma temperatura fixa, enquanto a amplificação de temperatura variável é uma amplificação cíclica estritamente de acordo com a extensão de desnaturação-recozimento.O tempo de amplificação de temperatura constante foi realizado, enquanto o tempo de amplificação de temperatura variável é muito afetado pela taxa de aumento e queda de temperatura do instrumento (atualmente, muitos fabricantes conseguiram fazer 40 ciclos de amplificação em cerca de 30 minutos).
Se as condições do laboratório forem boas e o zoneamento rigoroso, é razoável dizer que a diferença de precisão entre os dois não será grande.Contudo, a amplificação de temperatura variável sintetizará mais produtos de ácidos nucleicos num tempo relativamente mais curto.Para laboratórios sem zoneamento rigoroso e pessoal com treinamento profissional, o risco de vazamento de aerossol de ácido nucleico será maior, o falso positivo ocorre quando o vazamento acontece e é extremamente difícil de eliminar.
Além disso, a amplificação a temperatura constante também é mais propensa a amplificação não específica quando a amostra é complexa (a temperatura relativa da reação é mais baixa e quanto maior a temperatura de extensão, melhor a especificidade de ligação do primer).
No que diz respeito à tecnologia atual, a amplificação de temperatura variável é mais confiável.
5. Como evitar o risco de vazamento de produtos de amplificação de ácidos nucleicos?
Atualmente, muitos fabricantes escolhem o tubo PCR tipo glândula como tubo de reação de ácido nucleico, que é selado por fricção, e a desnaturação de temperatura na desnaturação de temperatura variável na amplificação de PCR de temperatura variável atinge 90 graus.
Centígrados.O processo repetido de expansão com calor e contração com frio é um grande desafio para a vedação do tubo PCR, e o tubo PCR tipo glândula é relativamente fácil de causar vazamento.
É preferível adotar a reação com kit/tubo completamente vedado para evitar vazamento do produto da reação.Seria perfeito se pudesse ser elaborado um kit totalmente selado para extração e detecção de ácidos nucleicos.
Portanto, a nova máquina totalmente automática de extração e detecção de ácido nucleico da New Tech tem as cinco opções ideais acima.
Horário da postagem: 09/08/2023
